恩諾沙星-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備方法主要有以下幾種：

戊二醛法

• 原理：戊二醛作為雙功能交聯(lián)劑，能與過(guò)氧化物酶和恩諾沙星的氨基結(jié)合，形成穩(wěn)定的標(biāo)記物。

• 操作步驟：

• 將恩諾沙星和過(guò)氧化物酶分別溶解于適當(dāng)?shù)木彌_液中，如0.01mol/L pH 7.2的磷酸鹽緩沖液。

• 按一定比例混合恩諾沙星和過(guò)氧化物酶溶液，加入適量的戊二醛，使戊二醛的終濃度為0.1%-0.5%。

• 室溫下攪拌反應(yīng)2-4小時(shí)，或4℃過(guò)夜。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用透析袋對(duì)0.01mol/L pH 7.2的磷酸鹽緩沖液透析，去除未反應(yīng)的戊二醛和其他小分子雜質(zhì)。

• 透析后的標(biāo)記物可加入適量的甘油，分裝后于-20℃保存。

過(guò)碘酸鈉法

• 原理：過(guò)碘酸鈉可將過(guò)氧化物酶的糖基氧化成醛基，醛基與恩諾沙星的氨基結(jié)合形成Schiff氏堿，再用硼氫化na還原穩(wěn)定。

• 操作步驟：

• 溶解過(guò)氧化物酶于0.1mol/L NaHCO3溶液中，加入新配制的0.1mol/L NaIO4溶液，室溫避光反應(yīng)20-30分鐘。

• 反應(yīng)后的溶液裝入透析袋，對(duì)0.001mol/L pH 4.0的醋酸緩沖液透析過(guò)夜，期間更換透析液幾次。

• 將恩諾沙星用0.01mol/L碳酸緩沖液稀釋至一定濃度，并用0.01mol/L碳酸緩沖液將活化好的過(guò)氧化物酶溶液pH調(diào)至9.5左右。

• 將恩諾沙星溶液加入過(guò)氧化物酶溶液中，室溫或4℃反應(yīng)2小時(shí)。

• 加入新鮮配制的5mg/ml NaBH4溶液，室溫作用30分鐘，再加入適量NaBH4溶液，室溫或4℃過(guò)夜。

• 最后對(duì)0.01mol/L PBS透析過(guò)夜，加入保存液于-20℃保存。

改良過(guò)碘酸鹽氧化法

• 原理：與過(guò)碘酸鈉法類似，也是通過(guò)過(guò)碘酸鹽氧化過(guò)氧化物酶，使其產(chǎn)生醛基，然后與恩諾沙星的氨基結(jié)合，形成穩(wěn)定的標(biāo)記物。

• 操作步驟：

• 溶解過(guò)氧化物酶于超純水中，加入新配制的0.1mol/L多碘酸鈉，室溫或4℃冰箱反應(yīng)20-30分鐘。

• 反應(yīng)完后裝入透析袋，對(duì)0.001mol/L pH 4.0的醋酸緩沖液透析過(guò)夜，期間更換透析液幾次。

• 將恩諾沙星用0.01mol/L碳酸緩沖液稀釋至一定濃度，并用0.01mol/L碳酸緩沖液將活化好的過(guò)氧化物酶溶液pH調(diào)至9.5左右。

• 將恩諾沙星溶液加入過(guò)氧化物酶溶液中，室溫或4℃反應(yīng)2小時(shí)。

• 加入新鮮配制的5mg/ml NaBH4溶液，室溫作用30分鐘，再加入適量NaBH4溶液，室溫或4℃過(guò)夜。

• 最后對(duì)0.01mol/L PBS透析過(guò)夜，加入保存液于-20℃保存。

關(guān)于我們:

陜西星貝愛(ài)科生物科技經(jīng)營(yíng)的產(chǎn)品種類包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標(biāo)記物、蛋白交聯(lián)劑、小分子PEG衍生物、點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)品、樹(shù)枝狀聚合物、環(huán)糊精衍生物、大環(huán)配體類、熒光量子點(diǎn)、透明質(zhì)酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近紅外熒光染料，聚苯乙烯微球，上轉(zhuǎn)換納米發(fā)光顆粒，MRI核磁造影產(chǎn)品，熒光蛋白及熒光探針等等。

溫馨提示：供應(yīng)產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體！

相關(guān)產(chǎn)品：

甘氨鵝脫氧膽酸-生物素，Biotin-Glycochenodeoxycholic Acid

水蘇糖-生物素，STACHYOSE-BIOTIN

生物素-3-羥基丁酸，Biotin-3-hydroxybutyric acid

Spermine-biotin，精胺-生物素

水飛薊賓-生物素，SILYBIN-BIOTIN

生物素標(biāo)記馬兜鈴酸，Biotin-Aristolochic acid

生物素-迷迭香酸，Biotin-Rosmarinic acid

Biotin-Heparin，生物素-肝素

生物素-泊洛沙姆

生物素-薯蕷皂苷元，Biotin-Yamogenin